كنزك جوه الخلية: دليلك الشامل لاستخلاص الـ DNA والـ RNA زي المحترفين!🧬🔬لو فكرنا في الخلية هنلاقيها زي “البرتقالة” بالظبط وعشان توصل للعصير الثمين اللي جواها (اللي هو الـ DNA أو الـ RNA)، لازم تعدي بمراحل مدروسة عشان تطلعه نقي ومن غير شوائب الموضوع مش مجرد بروتوكول بتمشي عليه، ده فن وعلم وتفاصيل كتير بتفرق في النتيجة النهائية 1. البداية.. إزاي بنكسر “القشرة”؟ (Lysis) 🔨أول خطوة هي تحطيم الأغشية عشان نحرر الأحماض النووية. بنستخدم “مطرقة” ميكانيكية أو كيميائية:الطحن اليدوي: زي استخدام الهون (Mortar and Pestle) مع النيتروجين السائل، وده أساسي في الأنسجة الناشفة زي بذور الشعير أو النباتات الـBead-Beating:تكنولوجيا حديثة بتستخدم كرات معدنية أو سيراميك بتهز العينة بسرعة عالية جداً، ودي أثبتت كفاءة رهيبة في عينات البراز عشان تكسر جدران البكتيريا “جرام موجب” القوية المواد الكيميائية: بنستخدم منظفات (Detergents) زي SDS اللي بيذوب الدهون في أغشية الخلايا الحيوانية والبكتيريا، أو CTAB اللي بيعتبر “بطل” استخلاص النباتات والطحالب عشان بيقدر يتعامل مع السكريات المعقدة (Polysaccharides) والبوليفينول اللي بيعطلوا الشغل بعد كدة [8-10].2. إزاي بننقي العصير من الشوائب؟ (Purification) 🧼بعد ما حررنا الـ DNA، بيبقى معاه بروتينات ودهون لازم نتخلص منها:الProteinase K: ده “المقص” اللي بيقطع أي بروتينات موجودة وبيخلصنا من إنزيمات الـ DNases والـ RNases اللي ممكن تكسر العينة الفينول والكلوروفورم: الطريقة اليدوية “Old School”؛ الفينول بيدوب البروتينات والكلوروفورم بيساعد في فصل الطبقات بوضوح 3. الـ pH.. السر الصغير اللي بيفرق بين الـ DNA والـ RNA!🧪لو بتستخدم طريقة “الفينول-كلوروفورم”، درجة الحموضة (pH) هي اللي بتحدد هتاخد إيه: الpH متعادل (7-8): DNA والـ RNA هيفضلوا مع بعض في الطبقة المائية اللي فوق الpH حامضي (4-5): الـ DNA هيتغير شحنته وينزل تحت في الطبقة العضوية، ويسيب لك الـ RNA “لوحده” فوق نقي وجميل 4. التكنولوجيا الحديثة: أعمدة السيليكا ولا الخرز المغناطيسي؟🤖الـSilica Columns: العينة بتعدي على فلتر سيليكا، الـ DNA بيلزق فيه بفضل أملاح معينة (Chaotropic salts)، وبعدين بنغسله ونطلعه بماء نقيالـMagnetic Beads:أسرع وأحدث طريقة! خرز مغناطيسي مغطى بالسيليكا بيلقط الـ DNA، وبمغناطيس خارجي بنفصلهم في ثواني الطريقة دي هي “الجوكر” في الأجهزة الأوتوماتيكية زي KingFisher و Maxwell عشان بتخلص عينات كتير في وقت قياسي وبدقة عالية 5. اختبار الجودة.. هل شغلك تمام؟ (Quality Control)✅مش معنى إنك طلعت “سائل” إنك نجحت، لازم تتأكد من حاجتين:النقاء (Purity):بنقيس الامتصاص بجهاز Spectrophotometer. الـ DNA النقي لازم النسبة بتاعته (A260/280) تكون حوالي 1.8، والـ RNA تكون حوالي 2.0 لو النسبة أقل، يبقى عندك بروتينات أو فينول متبقيالسلامة (Integrity): الـ DNA المكسر بيبان “Smear” في الجل، أما الـ RNA فبنقيس له حاجة اسمها RIN score من 1 لـ 10؛ لو فوق 7 يبقى عظمة 6. ليه الـ RNA دايماً “زعلان” ومنكّد عليك؟ 😤الـ RNA جزيء هش جداً وغير مستقر كيميائياً بسبب مجموعة “الهيدروكسيل” الزيادة اللي فيه أي تأخير أو لمسة من غير جوانتي ممكن تخلي إنزيمات الـ RNases اللي في الهوا أو على إيدك تدمر العينة في ثواني عشان كدة لازم تجمده فوراً في نيتروجين سائل أو تستخدم محاليل حفظ زي RNAlaterفي المختبر، الأحماض النووية هي “المخطوطة الأصلية” للحياة، فتعامل معاها بالاحترام والدقة اللي تستحقها! 📚✨#MolecularBiology #DNAExtraction #RNA #LabWork #Biotechnology #ScienceInArabic
